Préparation et autoclavage de milieux de culture à base d'agar-agar

En microbiologie, un milieu de culture est un environnement artificiel créé dans le but de mettre en culture (faire croître) des cellules (prélevées sur un organisme) ou des micro-organismes (levure, moisissure, bactérie) pour pouvoir les étudier. En fonction de l'étude, un milieu de culture peut être favorable ou défavorable à la multiplication des cellules.

Les stérilisateurs de paillasse CertoClav sont utilisés entre autres pour la préparation de milieux de culture à base d'agar-agar. Ci-dessous, une séquence d'instructions pour la préparation et la stérilisation d'un tel milieu, à l'aide d'un autoclave CertoClav.

- Tout d'abord, à l'intérieur d'une erlenmeyer et à froid, délayer la poudre d'agar dans de l'eau. La fiole ne doit pas être remplie à plus de 3 / 4, pour éviter son débordement par la suite. Mélanger en tournant, jusqu'à ce que la dissolution soit presque complète.

 - Placer l'erlenmeyer dans la chambre de l'autoclave, allumer l'appareil et amener le liquide à ébullition.

 - Fermer la porte de l'autoclave, mais garder la soupape de vapeur ouverte. Quand la température se stabilise à 100°C, faire infuser le milieu de culture durant 10 minutes. La poudre d'agar-agar devrait être ainsi totalement dissoute. Ensuite, vérifier, en sortant l'erlenmeyer, que le liquide soit bien clair.

- Si c'est bien le cas, remettre l'erlenmeyer dans l'autoclave, le refermer et cette fois verrouiller la soupape pour l'autoclavage (stérilisation à la vapeur). Amener la température à la valeur souhaitée. En effet, à ce moment-là, différentes durées et températures peuvent être appliquées, en fonction du traitement nécessaire. Dans tous les cas, se référer aux instructions d'autoclavage. A la fin de la durée spécifique de traitement, le milieu de culture est stérilisé.

- Arrêter enfin l'autoclave et laisser refroidir. NB : Ne pas ouvrir directement la soupape de l'autoclave si l'erlenmeyer contenant le milieu de culture est étanche à la pression. Si c'est le cas, laisser la température descendre jusqu'à 80°C avant d'ouvrir la soupape, cela évitera tout éclatement ou débordement du récipient. Il est d'ailleurs souvent recommandé de ne pas visser les fermetures des récipients passant à l'autoclave, mais plutôt de les boucher avec du coton dans une gaze, le tout recouvert de papier aluminium.