Préparation et autoclavage de milieux de culture à base d'agar-agar

En microbiologie, un milieu de culture est un environnement artificiel créé dans le but de mettre en culture (faire croître) des cellules (prélevées sur un organisme) ou des micro-organismes (levure, moisissure, bactérie) pour pouvoir les étudier. En fonction de l'étude, un milieu de culture peut être favorable ou défavorable à la multiplication des cellules.

Les stérilisateurs de paillasse CertoClav sont utilisés entre autres pour la préparation de milieux de culture à base d'agar-agar. Ci-dessous, une séquence d'instructions pour la préparation et la stérilisation d'un tel milieu, à l'aide d'un autoclave CertoClav.

- Tout d'abord, à l'intérieur d'une erlenmeyer et à froid, délayer la poudre d'agar dans de l'eau. La fiole ne doit pas être remplie à plus de 3 / 4, pour éviter son débordement par la suite. Mélanger en tournant, jusqu'à ce que la dissolution soit presque complète.

 - Placer l'erlenmeyer dans la chambre de l'autoclave, allumer l'appareil et amener le liquide à ébullition.

 - Fermer la porte de l'autoclave, mais garder la soupape de vapeur ouverte. Quand la température se stabilise à 100°C, faire infuser le milieu de culture durant 10 minutes. La poudre d'agar-agar devrait être ainsi totalement dissoute. Ensuite, vérifier, en sortant l'erlenmeyer, que le liquide soit bien clair.

- Si c'est bien le cas, remettre l'erlenmeyer dans l'autoclave, le refermer et cette fois verrouiller la soupape pour l'autoclavage (stérilisation à la vapeur). Amener la température à la valeur souhaitée. En effet, à ce moment-là, différentes durées et températures peuvent être appliquées, en fonction du traitement nécessaire. Dans tous les cas, se référer aux instructions d'autoclavage. A la fin de la durée spécifique de traitement, le milieu de culture est stérilisé.

- Arrêter enfin l'autoclave et laisser refroidir. NB : Ne pas ouvrir directement la soupape de l'autoclave si l'erlenmeyer contenant le milieu de culture est étanche à la pression. Si c'est le cas, laisser la température descendre jusqu'à 80°C avant d'ouvrir la soupape, cela évitera tout éclatement ou débordement du récipient. Il est d'ailleurs souvent recommandé de ne pas visser les fermetures des récipients passant à l'autoclave, mais plutôt de les boucher avec du coton dans une gaze, le tout recouvert de papier aluminium.

Préparation de milieu de culture avec les stérilisateurs à vapeur CertoClav

Les autoclaves CertoClav sont pleinement adaptés à la préparation de milieux de culture en laboratoire. Leur aspect compact leur permet de se loger aisément sur les paillasses, et les petites quantités de milieu de culture peuvent être préparées très rapidement.

Ces préparateurs de milieu de culture sont peu coûteux (à partir de 1853€ hors taxe pour le modèle manuel), très rapides (possibilité de préparer un milieu de culture en 40 minutes), faciles à utiliser de par leur conception ergonomique, et robustes (il n'est pas rare de voir des appareils CertoClav en utilisation pendant plus de 20 ans).

Deux modèles de préparateurs de milieux de culture 

En ce qui concerne la préparation de milieux de culture, les deux modèles d'autoclaves CertoClav (EL et MultiControl) permettent des utilisations spécifiques.

Certoclav EL

L'autoclave préparateur de milieu de culture EL permet un contrôle manuel précis de la température de traitement (par exemple : exactement 100°C, température adaptée à la dissolution optimale des milieux de culture en poudre). Ce modèle est décliné en deux versions, en fonction de leurs vannes respectives : une vanne adaptée à des températures de 115°C et 121°C, et une vanne adaptée à 121°C et 138°C. La première version permet la préparation de milieux de culture sensibles à la chaleur, alors que la deuxième permet le traitement des prions.

Certoclav Multicontrol

Le modèle d'autopréparateur de milieu de culture MultiControl est quant à lui entièrement automatisé, et permet de programmer des séquences de température simplement en entrant les valeurs de temps et de température dans son module externe de contrôle. Ainsi, on peut par exemple faire une préparation de gélose à base d'agar-agar (100°C), puis l'autoclaver (121°C), et enfin la maintenir au chaud (80°C), simplement en paramétrant l'appareil avec les temps et les températures spécifiques. Le MultiControl possède également un système de contrôle automatique des traitements, de manière à s'assurer que les opérations se déroulent sans problème lors de la séquence programmée.