Utilisation d'un autoclave CertoClav

Les autoclaves utilisent la vapeur d'eau sous pression comme agent stérilisant, pour la destruction des micro-organismes. Ils constituent les systèmes disponibles les plus fiables à ce jour pour la décontamination des déchets de laboratoire et la stérilisation de la verrerie de laboratoire, des milieux de culture et des réactifs. Pour un transfert efficace de la chaleur, l'air doit être évacué hors de la chambre d'autoclave.

Avant le traitement

• S'assurer que les objets à autoclaver peuvent être traités en toute sécurité (sensibilité à la chaleur ou à la pression
• Inspecter toute verrerie destinée au traitement, pour voir des fissures éventuelles.
• Emballer efficacement les objets à autoclaver.
• Placer un ruban indicateur de passage à l'autoclave sur chaque objet à traiter.

Chargement de l'autoclave

• Positionner les objets et substances à autoclaver de manière ordonnée, suffisamment espacés les uns des autres, de façon à ce que la vapeur puisse pénétrer efficacement.
• Refermer la porte de l'autoclave, en s'assurant que la porte soit verrouillée correctement.

Utilisation de l'autoclave

• Choisir le programme approprié pour le matériel à traiter dans l'autoclave.
• Certains cycles automatiques de traitement sont prédéfinis : il suffit dans ce cas d'appuyer sur le bouton adapté. Les cycles utilisateur requièrent une programmation préalable.

Déchargement de l'autoclave

• Bien vérifier que le programme soit terminé et que pression et température soient redescendus jusqu'à un niveau sûr.
• Ouvrir légèrement la porte de l'autoclave, d'environ 2 à 3 cm, de manière à libérer la vapeur résiduelle, tout en permettant à la pression des liquides de se normaliser à 1 atm.
• Vérifier le changement de couleur du ruban indicateur de passage. Si aucun changement de couleur n'a eu lieu, cela indique que le cycle de traitement a échoué. L'autoclavage de la charge devra être effectué à nouveau dans un stérilisateur fonctionnant correctement.

Rendez-vous sur le site du fabricant CertoClav pour consulter le guide détaillé, qui explique comment utiliser les autoclaves de laboratoire de la marque. Vous trouverez également des informations sur ce qu'il faut faire en cas de dysfonctionnement d'un autoclave, ou en cas de déversement.

Pour en savoir plus sur le processus d'autoclavage, sur la sécurité et sur le fonctionnement des autoclaves de paillasse, consulter le Guide de traitement d'autoclavage en ligne mis à disposition par CertoClav.

Préparation et autoclavage de milieux de culture à base d'agar-agar

En microbiologie, un milieu de culture est un environnement artificiel créé dans le but de mettre en culture (faire croître) des cellules (prélevées sur un organisme) ou des micro-organismes (levure, moisissure, bactérie) pour pouvoir les étudier. En fonction de l'étude, un milieu de culture peut être favorable ou défavorable à la multiplication des cellules.

Les stérilisateurs de paillasse CertoClav sont utilisés entre autres pour la préparation de milieux de culture à base d'agar-agar. Ci-dessous, une séquence d'instructions pour la préparation et la stérilisation d'un tel milieu, à l'aide d'un autoclave CertoClav.

- Tout d'abord, à l'intérieur d'une erlenmeyer et à froid, délayer la poudre d'agar dans de l'eau. La fiole ne doit pas être remplie à plus de 3 / 4, pour éviter son débordement par la suite. Mélanger en tournant, jusqu'à ce que la dissolution soit presque complète.

 - Placer l'erlenmeyer dans la chambre de l'autoclave, allumer l'appareil et amener le liquide à ébullition.

 - Fermer la porte de l'autoclave, mais garder la soupape de vapeur ouverte. Quand la température se stabilise à 100°C, faire infuser le milieu de culture durant 10 minutes. La poudre d'agar-agar devrait être ainsi totalement dissoute. Ensuite, vérifier, en sortant l'erlenmeyer, que le liquide soit bien clair.

- Si c'est bien le cas, remettre l'erlenmeyer dans l'autoclave, le refermer et cette fois verrouiller la soupape pour l'autoclavage (stérilisation à la vapeur). Amener la température à la valeur souhaitée. En effet, à ce moment-là, différentes durées et températures peuvent être appliquées, en fonction du traitement nécessaire. Dans tous les cas, se référer aux instructions d'autoclavage. A la fin de la durée spécifique de traitement, le milieu de culture est stérilisé.

- Arrêter enfin l'autoclave et laisser refroidir. NB : Ne pas ouvrir directement la soupape de l'autoclave si l'erlenmeyer contenant le milieu de culture est étanche à la pression. Si c'est le cas, laisser la température descendre jusqu'à 80°C avant d'ouvrir la soupape, cela évitera tout éclatement ou débordement du récipient. Il est d'ailleurs souvent recommandé de ne pas visser les fermetures des récipients passant à l'autoclave, mais plutôt de les boucher avec du coton dans une gaze, le tout recouvert de papier aluminium.

Contrôle du processus de stérilisation

Contrôle  du processus de stérilisation – vérification chimique et biologique du passage à l'autoclave

Ce type de vérification a pour but de contrôler la qualité de l'autoclavage et de la stérilisation. L'objectif de l'opération est de détecter les défaillances de stérilisation et de les réduire autant que possible. Les indicateurs de passage à l'autoclave sont utilisés pour valider que l'autoclave fonctionne correctement.

Indicateurs de passage à l'autoclave
Il existe deux types d'indicateurs de passage : les indicateurs chimiques et les indicateurs biologiques.

Indicateurs chimiques

Des indicateurs chimiques sont conçus à base de substances chimiques réactives. Ces indicateurs réagissent par un changement de couleur à une condition spécifique lors du traitement dans la chambre de stérilisation. Les indicateurs chimiques de passage se présentent sous de nombreuses formes différentes, comme des étiquettes ou du ruban adhésif. Le ruban indicateur de passage à l'autoclave doit être utilisé lors de tous les processus de stérilisation pour confirmer qu'une température de 121°C a été atteinte à l'intérieur de l'enceinte du stérilisateur. Bien que cela ne prouve pas que l'objet soit stérile, ceci fournit une indication bien visible, de sorte que vous sachiez que l'instrument, le récipient ou le déchet a été exposé à la température d'autoclavage appropriée.

Indicateurs biologiques

La surveillance biologique se fait à l'aide de micro-organismes techniquement préparés (indicateurs biologiques) afin de démontrer la stérilisation après le cycle d'autoclavage. Les indicateurs biologiques sont constitués de populations normalisées de spores bactériennes résistantes sur des bandes ou sous forme de suspension dans des flacons préemballés. Ce test à la spore bactérienne est utilisé afin de déterminer si les paramètres du cycle de stérilisation ont été suffisants pour tuer les micro-organismes d'essai. L'utilisation des indicateurs biologiques de la réussite de la stérilisation est une méthode fiable ; cette méthode doit être utilisée à chaque autoclavage.

Si vous voulez en savoir plus sur les indicateurs de passage à l'autoclave, veuillez vous rendre sur le site du constructeur.

Système de sécurité CertoClav

Les autoclaves CertoClav sont équipés du système CertoSecure à 4 niveaux de sécurité qui garantit une utilisation sûre et sans danger.

CertoSecure - système à multiples sécurités

Le système de sécurité à 4 protections CertoSecure comprend une soupape anti-surpression, une soupape de pression, un dispositif de verrouillage sécurisé de la porte de l'autoclave empêchant son ouverture sous l'effet de la pression, et un dispositif spécial à évidement anti-surpression.

Verrouillage de sécurité

Ce système empêche l'ouverture de la porte de l'autoclave sous l'effet de la pression. La vanne de l'autoclave reste ouverte tant que le verrouillage n'est pas correctement effectué.

Vanne de commande sécurité anti-blocage

Celle-ci s'ouvre automatiquement si la pression de fonctionnement normal est dépassée.

Soupape anti-surpression

En cas de défaillance de la vanne de sécurité antiblocage, la soupape anti-surpression s'ouvre lorsque la pression à l'intérieur de l'autoclave atteint 3,6 bar, puis se referme ensuite quand la pression est revenue à une valeur normale de fonctionnement.

Dispositif de sécurité à évidement anti-surpression

Ce dispositif de sécurité se situe au bord de l'enceinte, à gauche de la poignée. Si l'autoclave est soumis à une pression trop élevée, le joint d'étanchéité de la porte est rejeté par ce système, évacuant la vapeur sous pression, mais également rendant le stérilisateur inutilisable. Si une telle éjection se produit, il faut alors renvoyer l'autoclave en SAV.

Pour en savoir plus sur le système de sécurité CertoSecure et trouver des informations à propos de la sécurité, visitez le site du fabricant.

Laboratoire de microbiologie

Autoclave de laboratoire en microbiologie

Dans un laboratoire de microbiologie, un autoclave est utilisé pour préparer des milieux de culture et des réactifs, et pour la stérilisation de matériel, et de déchets contaminés avant leur élimination.

Bien que la stérilisation peut être réalisée en utilisant un certain nombre de techniques telles que l'irradiation UV, la chaleur sèche, l'utilisation de produits chimiques etc..., les stérilisateurs les plus largement utilisés dans les laboratoires de microbiologie sont des autoclaves à vapeur.
Les autoclaves de laboratoire éradiquent les micro-organismes par l'utilisation de la vapeur sous pression pour provoquer une dénaturation de leurs protéines. Au cours de l'autoclavage, le contenu (liquide ou solide) est exposé à de la vapeur saturée à la température requise pendant une durée approprié.

Il est nécessaire de démontrer de manière vérifiable que non seulement les organismes ont été éradiqués, mais aussi, en particulier avec les milieux de culture, que les caractéristiques physico-chimiques des milieux, permettant la croissance des organismes, n'ont pas été compromises par le cycle de stérilisation.

L'élimination des déchets est moins exigeante, dans le sens où une méthode de destruction définitive et totale peut être utilisée, les paramètres température/temps/pression pouvant être manipulés librement, de telle façon qu'aucun organisme ne puisse survivre au cycle d'autoclavage.

Considérations avant l'achat ?

Il est important de réfléchir à ce que vous allez mettre dans l'autoclave, afin de s'assurer que celui que vous achetez a les spécifications requises pour effectuer des traitements efficaces.

Chargement

L'élément le plus critique est le chargement. Placer trop de matériel à l'intérieur de l'autoclave ne permet pas à la vapeur de circuler assez librement et profondément. Assurez-vous que l'autoclave que vous achetez soit adapté au volume et au type de matériel que vous devez traiter.

Taille

Les autoclaves peuvent varier en taille, des petits modèles de paillasse qui prennent peu de place dans le laboratoire, jusqu'aux grands modèles – s'apparentant aux systèmes à échelle industrielle – qui se trouvent le plus souvent dans un local dédié.
Combien avez-vous d'espace à votre disposition ? Le manque d'espace au sol indique qu'un autoclave de paillasse est plus approprié - mais ceux-ci ne seront pas en mesure de traiter d'aussi grandes charges qu'avec un grand autoclave.

Préparation de milieux de culture

Pour la préparation des milieux de culture, des systèmes existent, permettant des modes de fonctionnement multi-cycles - utiles pour les milieux tels que l'agar.

Pour plus d'informations, visitez le site de CertoClav : http://www.certoclav.com/fr/

Guide de traitement à l'autoclave

CertoClav publie son guide de traitement à l'autoclave sur leur site web, dans le but d'aider les utilisateurs d'autoclaves à accéder facilement à toutes les informations sur le processus d'autoclavage. Le guide décrit le fonctionnement d'un appareil autoclave ainsi que le processus de stérilisation ; il couvre également les questions de sécurité lors de l'utilisation d'un autoclave, donne des recommandations concernant l'équipement de protection, et donne une liste des mesures à prendre en cas de panne.

Ce guide se focalise sur le type de stérilisateur à vapeur proposé par le fabricant, à savoir l'utilisation d'un autoclave de paillasse portable. CertoClav apporte également des informations variées à propos de l'autoclavage de prions, des indicateurs de stérilisation les plus largement utilisés, des règles de sécurité, et plus encore dans sa base de connaissances en développement.

Toutes les informations peuvent être consultées sur le site de CertoClav. Pour en savoir plus, veuillez vous rendre à la table des matières de la section sur l'autoclavage.

La stérilisation par autoclave

La stérilisation à la vapeur

L'autoclave CertoClav est un outil dédié à de multiples applications en laboratoire, la principale étant la stérilisation à la vapeur.

Dans un laboratoire de microbiologie, la stérilisation de substances et d'instruments est un procédé incontournable sur lequel repose l'ensemble des autres traitements et opérations.

La stérilisation à vapeur d'eau sous pression est basée sur l'efficacité de la chaleur humide dans la destruction d'agents pathogènes. L'effet conjoint de la vapeur à haute température et de la surpression (en général 2 ou 3 bar) fournit de très bon résultats en matière d'élimination des germes microbiens. Une substance ou la surface d'un objet est considérée stérile quand la probabilité de la présence de germes est inférieure à un millionième.

Autoclavage

L'appareil dans lequel sont stérilisés les objets et substances est un autoclave. D'ailleurs, le terme d'autoclavage réfère également à cette méthode de stérilisation vapeur.

La méthode est la suivante : une certaine quantité d'eau distillée, non-déminéralisée est placée au préalable à l'intérieur de l'autoclave. L'instrument ou le déchet est placé à l'intérieur de l'enceinte, puis celle-ci est refermée grâce à un couvercle étanche. L'ensemble est soumis à une haute température, supérieure à celle de l'ébullition (121°C pour un autoclavage classique, contre 134-136°C pour un traitement contre les prions) pendant une durée définie en fonction des micro-organismes cibles (germes ou prions).

Le traitement à l'autoclave passe par quatre phases distinctes. D'abord la montée en température, pendant laquelle l'air est entièrement chassé hors de l'enceinte, remplacé par de la vapeur d'eau. La phase d'équilibrage peut alors démarrer, de manière à ce que tous les points de l'objet à autoclaver soient soumis à la même température. Vient alors la phase de stérilisation, dont la durée dépend du type de traitement que l'on veut effectuer. Enfin, la phase de refroidissement permet un retour à la température ambiante et à la pression atmosphérique. A l'issue de cela, l'opération est alors terminée.